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- 產(chǎn)品名稱： 可溶性蛋白含量(SP)試劑盒(考馬斯亮藍法) 微板法
- 產(chǎn)品貨號： CSWB0369-96
- 貨期： 現(xiàn)貨
- 價格與訂購： 260
- 數(shù)量：
庫存： 5
- 規(guī)格： 96T
- 產(chǎn)品信息
- 如何訂購
產(chǎn)品簡介
在酸性溶液中，考馬斯亮藍G-250與蛋白質(zhì)結(jié)合形成藍色復(fù)合物；經(jīng)光譜掃描，該藍色復(fù)合物在600nm處有最大吸收峰，在一定的蛋白濃度范圍（1-1000μg/mL）內(nèi)，其顏色的深淺與蛋白質(zhì)的含量成正比。
測試盒組成和配制
所需的儀器和用品
酶標(biāo)儀、96孔板、離心機、可調(diào)式移液器、研缽和蒸餾水。
四、蛋白含量檢測：
建議正式實驗前選取2個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實驗流程，避免實驗樣本和試劑浪費！
1、樣本制備：
①組織樣本：
稱取約0.1g組織，加入1mL提取液（提取液可選用酶提取緩沖液、蒸餾水、生理鹽水）冰浴勻漿，12000rpm，4℃離心10min，取上清，即待測液。
【注】：依據(jù)研究經(jīng)驗，一般需將樣本粗提液稀釋到適當(dāng)倍數(shù)再進行測定，如10倍。實驗前可以先選2個樣本測定，摸索確定適合本次實驗的稀釋倍數(shù)。
②細菌或細胞樣本：
先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取500萬細菌或細胞加入1mL提取液；超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），12000rpm，4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
【注】：依據(jù)研究經(jīng)驗，一般需將樣本粗提液稀釋到適當(dāng)倍數(shù)再進行測定，如10倍。實驗前可以先選2個樣本測定，摸索確定適合本次實驗的稀釋倍數(shù)。
③液體樣本：澄清無色液體樣品可以直接測定。若渾濁，離心后取上清檢測。
【注】：依據(jù)研究經(jīng)驗，一般需將樣本稀釋到適當(dāng)倍數(shù)再進行測定，如10倍。實驗前可以先選2個樣本測定，摸索確定適合本次實驗的稀釋倍數(shù)。
2、上機檢測：
① 酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min以上，設(shè)定波長為600nm。
② 在96孔板中依次加入：
【注】：1.確保蛋白濃度在0~100μg/ml范圍內(nèi)，否則需要做相應(yīng)稀釋，即最好使A測定的值低于1.2；稀釋倍數(shù)D帶入公式計算。
2.去污劑、Triton X-100、十二烷基硫酸鈉（SDS）和0.1mol/L的NaOH溶液對該實驗會有影響。
結(jié)果計算
1、標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 3.8457x + 0.0136；x是標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y是△A。
2、蛋白含量 (mg/g 鮮重)=[(△A-0.0136)÷3.8457×V1]÷(W×V1÷V)×D
=0.26×(△A-0.0136)×D÷W
3、蛋白含量(mg/mL)= [(△A-0.0136)÷3.8457×V1]÷V1×D=0.26×(△A-0.0136)×D
V---提取液體積：1mL； V1---加入粗提液體積：0.04mL；
W---樣本質(zhì)量：g； D---稀釋倍數(shù)，未稀釋即為1。
附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程：
1標(biāo)準(zhǔn)品母液（0.5mg/mL）。
2把母液用蒸餾水稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0, 0.02, 0.04, 0.06, 0.08, 0.1. mg/mL。也可根據(jù)實際樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。
3依據(jù)測定管加樣表操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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