中文字幕久久不卡_国产成人二三视频_在线亚洲欧美久草_久久人人超碰九七_亚洲无码欧洲色图

M-MLV(H-) Reverse Transcriptase是通過(guò)體外大腸桿菌表達(dá)體系分子進(jìn)化技術(shù)篩選獲得的全新逆轉(zhuǎn)錄酶，與原始逆轉(zhuǎn)錄酶相比，MMLV(H-) Reverse Transcriptase大幅提高了熱穩(wěn)定性，在50℃的半衰期超過(guò)4h，可將逆轉(zhuǎn)錄溫度提高至50-55℃，避免RNA復(fù)雜二級(jí)

結(jié)構(gòu)對(duì)cDNA合成的抑制，可有效合成高質(zhì)量的cDNA。同時(shí)，M-MLV(H-) Reverse Transcriptase增加了多個(gè)點(diǎn)突變，增強(qiáng)了模板親和

力和行進(jìn)性，使得全長(zhǎng)cDNA的合成能力有了大幅度提升，對(duì)于常見的逆轉(zhuǎn)錄抑制物具有更高的耐受度，非常適合于富含多糖多酚的植

物組織RNA的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。

RT-PCR擴(kuò)增；

鏈cDNA合成；

制備cDNA探針；

合成具有高比例全長(zhǎng)cDNAs的cDNA文庫(kù)。

防止RNase污染

請(qǐng)保持實(shí)驗(yàn)區(qū)域潔凈；操作時(shí)需穿戴干凈的手套、口罩；實(shí)驗(yàn)所用的離心管、槍頭等耗材均需保證RNase-free。

引物選擇

1.后續(xù)實(shí)驗(yàn)為PCR

如果模板為真核生物來(lái)源，一般情況下首選Oligo dT，與真核生物mRNA的3' Poly A尾配對(duì)，可獲得最高產(chǎn)量的全長(zhǎng)cDNA。

基因特異性引物(GSP)的特異性最高。但有些情況下，用于PCR反應(yīng)的GSP無(wú)法有效引導(dǎo)第一鏈cDNA合成。這時(shí)，可改用Oligo dT或

Random hexamers重新進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。

Random hexamers特異性最低，所有RNA，包括mRNA，rRNA，tRNA均可以作為Random hexamers的模板。當(dāng)目標(biāo)區(qū)域具有復(fù)雜

二級(jí)結(jié)構(gòu)或GC含量較高，或模板為原核生物來(lái)源，使用Oligo dT或基因特異性引物(GSP)無(wú)法有效引導(dǎo)cDNA合成時(shí)，可使用Random 

hexamers為引物。

2.后續(xù)實(shí)驗(yàn)為qPCR

將Oligo dT與Random hexamers混合使用，可使mRNA的各個(gè)區(qū)域cDNA合成效率相同，有助于提高定量結(jié)果的真實(shí)性和重復(fù)性。